TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ
KHOA THỦY SẢN
TRẦN THỊ BÍCH NHƯ
NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG KẾT HỢP CỦA MALACHITE GREEN VÀ NHIỆT ĐỘ LÊN MỘT SỐ
CHỈ TIÊU SINH LÝ VÀ MEN CHOLINESTERASE CỦA
CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus)
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN
Có thể bạn quan tâm!
-
Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp của malachite green và nhiệt độ lên một số chỉ tiêu sinh lý và men cholinesterase của cá tra (pangasianodon hypophthalmus) - 2 -
Ảnh Hưởng Của Mg Đến Các Chỉ Tiêu Sinh Lý Và Sinh Hóa -
Xác Định Ảnh Hưởng Của Mg Và Nhiệt Độ Lên Các Chỉ Tiêu Huyết Học Và Men Che.
Xem toàn bộ 81 trang tài liệu này.
CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs.Ts. NGUYỄN THANH PHƯƠNG
2010
LỜI CẢM TẠ
Tôi xin trân trọng gởi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Nguyễn Thanh Phương đã tận tình hướng dẫn, động viên và cung cấp nhiều kiến thức quý báo đồng thời tạo điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành luận văn này.
Xin được gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô Đỗ Thị Thanh Hương về những lời khuyên quí báu và sự hướng dẫn nhiệt tình trong quá trình học tập và thực hiện đề tài.
Chân thành cảm ơn chị Nguyễn Hương Thùy và bạn Nguyễn Thị Kim Hà, Nguyễn Văn Toàn cán bộ bộ môn Dinh dưỡng và Chế biến Thủy sản đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong suốt quá trình thực hiện thí nghiệm.
Xin được gửi lời cảm ơn đến các em sinh viên lớp liên thông Nuôi trồng Thủy sản Khóa 33 và Nuôi trồng Thủy sản Liên thông Khóa 35 đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài.
Chân thành cảm ơn dự án “Nghiên cứu được thực hiện dưới sự tài trợ kinh phí của dự án - PhysCAM” (Nghiên cứu Đào tạo về sinh lý động vật Thủy sản ở Đồng Bằng Sông Cửu Long, 2007-2010 do DANIDA, Đan Mạch tài trợ) đã hỗ trợ kinh phí và phương tiện cho tôi thực hiện đề tài này.
Cám ơn các bạn lớp Cao học Nuôi Tồng Thủy sản K15 đã giúp đỡ, động viên tôi trong suốt khóa học.
Cuối cùng xin được bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè và những người than đã chia sẻ, giúp đỡ và động viên tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu tại trường.
Xin chân thành cảm ơn.
TÓM TẮT
Nghiên cứu về ảnh hưởng kết hợp của nhiệt độ và MG thông qua xác định khả năng chịu nhiệt của cá tra và sự thay đổi của các chỉ tiêu huyết huyết học và men ChE trong điều kiện nhiệt độ khác nhau. Từ đó tiến hành thí nghiệm tìm hiểu sự ảnh hưởng kết hợp của nhiệt độ và MG lên sự thay đổi một số chỉ tiêu huyết học và men ChE của cá tra (P.hypophthalmus).
Thí nghiệm xác định ngưỡng chịu đựng nhiệt độ và sự thay đổi của các chỉ tiêu sinh lý và hoạt tính của men ChE trong quá trình tăng và giảm nhiệt. Kết quả cho thấy trong điều kiện bình thường thì hoạt tính men ChE trong não cao hơn trong huyết tương và ChE chịu ảnh hưởng bởi nhiệt độ theo xu hướng nhiệt độ tăng hoạt tính tăng và nhiệt độ càng giảm khả năng ức chế hoạt tính ChE càng mạnh. Các chỉ tiêu huyết học trong điều kiện bình thường thì có xu hướng thấp hơn so với điều kiện nhiệt độ cao nhưng một số chỉ tiêu (hemoglobin, MCV,
MCH, MCHC) lại cao hơn so với điều kiện giảm nhiệt. Đồng thời cũng xác định ngưỡng nhiệt độ trên của cá tra là 42oC và ngưỡng dưới là 12oC. Trong nghiên cứu này khoảng nhiệt độ (220C, 280C và 340C) được chọn là khoảng nhiệt độ thích hợp và nhiệt độ bước đầu có sự ảnh hưởng đến các chỉ tiêu huyết học và hoạt tính của enzyme ChE trong não và máu của cá tra.
Thí nghiệm ảnh hưởng kết hợp của nhiệt độ (220C, 280C và 340C) và MG (0,15ppm và 02ppm) lên một số chỉ tiêu huyết học và hoạt tính của enzyme ChE lên cá tra có trọng lượng từ 15-20gam. Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối hoàn toàn ngẫu với 6 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Mật độ cá thí nghiệm 30 con/bể, thể tích nước là 200 lít, có bố trí sục khí trong suốt thời gian thí nghiệm.Thời gian thí nghiệm kéo dài trong 14 ngày với 5 lần thu mẫu và mỗi lần
thu 4 con/bể. Kết quả thí nghiệm cho thấy sự biến đổi của các chỉ tiêu huyết học trong điều kiện tiếp xúc với MG ở các khoảng nhiệt độ 22oC, 28oC và 34oC biến động theo nhiều xu hướng khác nhau. Số lượng hồng cầu, tỉ lệ huyết sắc tố,
MCH, MCV giảm khi tiếp xúc với MG ở các khoảng nhiệt độ khác nhau nhưng số lượng bạch cầu và hemoglobin giảm sau 6 giờ và 72 giờ tiếp xúc và lại tăng vào các khoảng thời gian gần kết thúc thí nghiệm. Nhiệt độ làm ảnh hưởng đến độc tính của MG, khi nhiệt độ tăng kết hợp với nồng độ MG cao thì khả năng ức chế ChE trong não càng mạnh. Riêng về hoạt tính của ChE trong máu có những biểu hiện theo nhiều xu hướng khác nhau theo nhiệt độ và nồng độ của MG và khả năng ức chế ChE trong máu cần có thời gian tiếp xúc dài hơn so với não.
Abstract
Study effect of MG and temperatune to some physiological parameters and the active of enzyme ChE of tra fish through determine the threshold of tolerated temperature, the changes of the physiological indicators and the active of enzyme ChE upon temperature of Tra fish (Pansianodon hypophthalmus) at the fry stage . From which determine the changes of some physiological indicators, enzyme ChE of Tra fish (Pangasianodon hypophthalmus) in different temperature ranges with different concentrations of MG.
Determine the threshold of tolerated temperature, the changes of the physiological parameters and the active of enzyme ChE upon temperature of Tra fish (Pansianodon hypophthalmus) fingerlings (15-20g). Results showed that in normal conditions, the enzyme activity in brain higher in plasma and ChE influenced by temperature. When the temperature increase, the processing enzyme activity increased and temperature decrease the ability to inhibit the enzyme ChE increases. In this study, the effects of temperature (220C, 280C and 340C) on selected the blood parameters and the inhibition of cholinesterase (ChE) activity in bain and blood of Tra fish (P. hypophthalmus).
Study the effects of MG (0,15ppm and 0,2ppm) and temperature (22 0C, 280C and 340C) on hematology and and enzyme Cholinesterase on Tra fish (P.hypophthalmus) fingerlings (15-20g) were randomly designed in the laboratory of College of Aquacultute and Fisheries, Can Tho Universit. Fish were stocked at density of 30 individuals per 200 liters tank.The experiment was three replications in continuously aerated composite tank system and implemented for 14 days. Sampling was performed at 5 distinct points of time.
Each time collect randomly four fish/tank, the last time harvest all fish left.
The results showed that the quantity of erythrocyte, hematorite value, MCH and MCV decreased after exposed to MG at concentrations and different temperatures, but the quantity of white blood cells and hemoglobin decreased after 6 hours and 72 hours of exposure and increased in the period near the end of the experiment. Temperature affects the toxicity of MG, as the temperature increases associated with higher concentrations of MG, the ability to inhibition ChE in brain stronger. ChE activity in the blood manifesting in many different trends with temperature and the concentration of MG and institutional ability to inhibit blood exposure time should be longer than the brain.
LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam kết luận văn này được hoàn thành trên kết quả nghiên cứu thực tế của tôi trong khuôn khổ dự án “Nghiên cứu được thực hiện dưới sự tài trợ kinh phí của dự án - PhysCAM” (Nghiên cứu Đào tạo về sinh lý động vật Thủy sản ở Đồng Bằng Sông Cửu Long, 2007-2010 do DANIDA, Đan Mạch tài trợ). Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ nghiên cứu nào liên quan trong cùng lĩnh vực. Dự án có quyền sử dụng kết quả của luận văn này để phục vụ cho dự án.
Trần Thị Bích Như
MỤC LỤC
LỜI CẢM TẠ i
TÓM TẮT ii
Abstract iii
LỜI CAM ĐOAN iv
MỤC LỤC v
DANH SÁCH HÌNH vii
DANH SÁCH BẢNG viii
DANH SÁCH BẢNG viii
DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ix
Phần 1 1
ĐẶT VẤN ĐỀ 1
1.1 Giới thiệu 1
1.2 Mục tiêu nghiên cứu 2
1.3 Nội dung của đề tài 2
1.4 Thời gian thực hiện 2
Phần 2 3
TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1 Giới thiệu về Malachite green (MG) 3
2.1.1 Sơ lược về MG 3
2.1.2 Đặc điểm hóa học 3
2.2. Một số nghiên cứu về ảnh hưởng của MG lên một số đối tượng thủy sản 5
2.3.1 Ảnh hưởng của MG đến các chỉ tiêu sinh lý và sinh hóa 8
2.3 Một số nghiên cứu về men ChE 11
Phần 3 14
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14
3.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 14
3.2 Vật liệu nghiên cứu 14
3.3 Bố trí thí nghiệm 14
3.3.1 Xác định ngưỡng chịu đựng nhiệt độ và sự thay đổi của các chỉ tiêu sinh lý và hoạt tính của men ChE theo nhiệt độ của cá tra (P. hypophthalmus) 14
3.3.2 Xác định ảnh hưởng của MG và nhiệt độ lên các chỉ tiêu huyết học và men ChE 15
3.4 Phương pháp phân tích 17
3.4.1 Phương pháp phân tích mẫu 17
3.5 Phương pháp xử lý số liệu 21
Chương 4 22
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22
4.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ lên chỉ tiêu huyết học và men ChE lên cá tra 22
4.1.1 Nhiệt độ ảnh hưởng đến hoạt động của cá 22
4.1.2.1 Các chỉ tiêu huyết học 22
4.1.2.2 Hoạt tính của enzyme ChE 24
4.1.3.1 Các chỉ tiêu huyết học 26
4.1.3.2 Hoạt tính của enzyme ChE 27
4.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ và MG lên một số chỉ tiêu huyết học và men ChE 30
4.2.1Các yếu tố môi trường bể thí nghiệm 30
4.2.2 Biểu hiện lâm sàng của cá khi tiếp xúc với MG 30
4.2.3 Ảnh hưởng của MG và nhiệt độ lên các chỉ tiêu huyết học 32
4.2.3.1 Ảnh hưởng của MG và nhiệt độ lên số lượng hồng cầu 32
4.2.3.2 Ảnh hưởng của MG và nhiệt độ lên tổng bạch cầu 34
4.2.3.3 Tỷ lệ huyết sắc tố (hematocrite) 35
4.2.3.4 Khối lượng trung bình của huyết sắc tố trong hồng cầu (MCH) 37
4.2.3.5 Nồng độ của huyết sắc tố trong hồng cầu – MCHC (%) 38
2.3.6 Thể tích hồng cầu – MCV (µm3) 39
4.2.3.7 Số lượng của huyết sắc tố (Hemoglobin) 40
4.2.4 Ảnh hưởng của nhiệt độ và MG lên hoạt tính của men ChE 42
4.2.4.1 Hoạt tính men ChE não 42
4.2.4.2 Hoạt tính men ChE trong máu 44
Phần 5 46
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46
5.1 Kết luận 46
5.2 Đề xuất 46
TÀI LIỆU THAM KHẢO 47
Phụ lục A 51
Phụ lục B 55
Phụ lục C 61
DANH SÁCH HÌNH
Hình 2.1: Công thức cấu tạo của MG (Oxolate) 3
Hình 2.2: Ba dạng của MG 4
Hình 2.3: Sự biến đổi của MG 5
Hình 2.4: Sự thay đổi của một số chỉ tiêu máu ở cá (Heteropneustes fossilis) 8
Hình 3.1: Buồng đếm Neubauer 18
Hình 3.2 Cách làm kính phết 19
Hình 4.1: Ảnh hưởng của nhiệt độ tăng lên hoạt tính ChE ở não và máu 25
Hình 4.2: Hoạt tính của men ChE trong não và máu cá tra khi giảm nhiệt độ .. 28 Hình 4.3: Biến động số lượng hồng cầu ảnh hưởng bởi nhiệt độ và MG 33
Hình 4.5: Ảnh hưởng của của nhiệt độ và MG lên ChE trong não 44
Hình 4.6: Ảnh hưởng của của nhiệt độ và MG lên ChE trong máu 45