Kết Luận: Kết Quả Trung Bình Của 2 Phòng Thử Nghiệm Giống Nhau, Phương Pháp Phân Tích Có Độ Chính Xác Cao Với Giá Trị Độ Tái Lặp Và Độ Lặp Lại Nhỏ.

B. XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ ẤN ĐỊNH CHẤT CHUẨN CONESSIN

Bảng 16.4. Kết quả xác định giá trị ấn định

Xếp tăng dần		xi x0 		x*i 1	x*x*2 i11	x*  i 2	x*x*2 i2 2
x*- 1.5s*					97,73		97,37
x*+ 1.5s*					98,02		98,37
1	97,41	0,47			97,41	0,2108	97,41	0,2108
2	97,53	0,34			97,53	0,1150	97,53	0,1150
3	97,74	0,14			97,74	0,0167	97,74	0,0167
4	97,81	0,06			97,81	0,0035	97,81	0,0035
5	97,81	0,06			97,81	0,0035	97,81	0,0035
6	97,84	0,03			97,84	0,0009	97,84	0,0009
7	97,91	0,03			97,91	0,0017	97,91	0,0017
8	97,92	0,05			97,92	0,0026	97,92	0,0026
9	97,93	0,06			97,93	0,0037	97,93	0,0037
10	97,93	0,06			97,93	0,0037	97,93	0,0037
11	97,97	0,09			97,97	0,0102	97,97	0,0102
12	98,63	0,75			98,63	0,5789	98,63	0,5789
x	97,87
n	12
s	0,294
x0	97,88
s0	0,096
x*n 	97,88				97,87		97,87
s*n 	0,096				0,333		0,333

Có thể bạn quan tâm!

• Nghiên cứu chiết xuất và tinh chế conessin, kaempferol, nuciferin từ dược liệu làm chất chuẩn đối chiếu trong kiểm nghiệm thuốc - Hoàng Thị Tuyết Nhung - 25
• Tạp Chất Liên Quan (Hplc) : Tiến Hành Theo Phụ Lục 5.3 – Dđvn Iv
• Định Lượng (Hplc) : Tiến Hành Theo Phụ Lục 5.3 – Dđvn Iv
• Nghiên cứu chiết xuất và tinh chế conessin, kaempferol, nuciferin từ dược liệu làm chất chuẩn đối chiếu trong kiểm nghiệm thuốc - Hoàng Thị Tuyết Nhung - 29
• Nghiên cứu chiết xuất và tinh chế conessin, kaempferol, nuciferin từ dược liệu làm chất chuẩn đối chiếu trong kiểm nghiệm thuốc - Hoàng Thị Tuyết Nhung - 30

Xem toàn bộ 249 trang tài liệu này.

Nhận xét: Giá trị s* không thay đổi sau 2 lần tính, giá trị ấn định được chọn là 97,87% với độ lệch chuẩn là 0,333.

Tính giá trị Z:

Bảng 16.5. Tập hợp kết quả của hai PTN và tính giá trị Z

TT

Xi (%) (nguyên trạng)	Z1 x* = 97,87 s* = 0,333
1	97,41	-1,38
2	97,53	-1,02
3	97,74	-0,39
4	97,81	-0,18
5	97,81	-0,18
6	97,84	-0,09
7	97,91	0,12
8	97,92	0,15
9	97,93	0,18
10	97,93	0,18
11	97,97	0,30
12	98,63		2,28
TB	97,80% (n = 11; RSD = 0,18%)

Nhận xét: Loại 1 giá trị /Z/ > 2. Các giá trị /Z/ còn lại đều < 2.

Chất chuẩn Conessin SKS: KC.10.16 - 04.02 có hàm lượng 97,80% tính theo nguyên trạng, độ không đảm bảo đo mở rộng U = ± 0,11% với hệ số phủ k = 2, ở mức tin cậy 95%.

PHỤ LỤC 17

A. BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ LIÊN PHÒNG THÍ NGHIỆM CHẤT CHUẨN KAEMPFEROL

SKS: KC 10.16 – 04.04

1. xác định hàm lượng mẫu thành phẩm (HPLC):

Yêu cầu: Mẫu thử phải có hàm lượng không được nhỏ hơn 95% tính theo chế phẩm nguyên trạng.

Tiến hành song song với chuẩn Kaempferol CRS (Trung Quốc), SKS:110861- 200808 có hàm lượng 95,9% (nguyên trạng).

Pha động: MeOH - Dung dịch natri dihydrophosphat 0,05M đã chỉnh đến pH 2,0 với H3PO4 đặc (55 : 45).

Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 10 mg chuẩn Kaempferol vào bình định

mức 50 ml, hòa tan và pha loãng vừa đủ bằng methanol. Hút chính xác 3 ml dung dịch này, pha loãng đến vừa đủ 20,0 ml bằng pha động.

Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 10 mg nguyên liệu Kaempferol vào bình định mức 50 ml, hòa tan và pha loãng vừa đủ bằng methanol. Hút chính xác 3 ml dung dịch này, pha loãng đến vừa đủ 20,0 ml bằng pha động.

Điều kiện sắc ký:

Cột thép không gỉ (250 mm x 4,6 mm) được nhồi octadecylsilyl silica gel dùng cho sắc ký (5 m).

Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 362 nm Tốc độ dòng: 1,4 ml/phút.

Thể tích tiêm: 20 l.

Cách tiến hành: Kiểm tra khả năng thích hợp của hệ thống: Cân bằng cột bằng hỗn hợp pha động ít nhất 30 phút. Tiêm dung dịch chuẩn, hệ số bất đối của pic Kaempferol không được lớn hơn 2,0; số đĩa lý thuyết của cột không được nhỏ hơn 5000. Tiêm riêng biệt 6 lần dung dịch chuẩn, độ lệch chuẩn tương đối của diện tích pic của 6 lần tiêm lặp lại không lớn hơn 2,0%.

Tiêm lần lượt dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Căn cứ vào diện tích pic thu được từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn và dựa vào hàm lượng % của Kaempferol C15H10O6 có trong chế phẩm.

Bảng 17.1. Các thông số của hệ sắc ký

Các thông số

Yêu cầu	PTN 1	PTN 2		PTN 3
Thiết bị	Shimadzu 20A- Series	HP100		Shimadzu
Cột sắc ký	C18, Phenomenex 250 x 4,6mm; 5µm	C18, Phenomenex 250 x 4,6mm; 5µm		C18, Gemini 250 x 4,6mm; 5µm
	Pha động	MeOH - Dd NaH2PO4 đặc (55 : 45)	0,05M đã chỉnh	đến	pH	2,0 với H3PO4
tr		16,2 phút	12,3 phút		10,40 phút
N	 3000	6999	5700		8970
T	 2,0	1,13	1,01		1,56
RSDS	 2,0 %	0,34 %	0,56 %		0,13%
dd chuẩn

Bảng 17.2. Kết quả xác định hàm lượng

Yêu cầu

PTN 1	PTN 2	PTN 3
	1	95,44	95,04	95,34
Hàm lượng	2	95,46	95,20	94,85
	3	95,06	96,28	95,51
mẫu thử không
	4	95,36	95,21	94,56
được nhỏ hơn
95 % tính theo	5	95,96	95,29	94,97
chế phẩm	6	96,04	95,07	95,19
nguyên trạng
		95,55 %	95,35 %	95,07 %
	TB	(nguyên trạng),	(nguyên trạng),	(nguyên trạng),
		n = 6,	n = 6,	n = 6,
		RSD = 0,39%	RSD = 0,49%	RSD = 0,36%

2. Xử lý kết quả theo thống kê:

Tập hợp kết quả các PTN và đánh giá theo ANOVA

Bảng 17.3. Kết quả đánh giá theo ANOVA

TÓM TẮT

Nhóm	Số KQ	Tổng	Trung bình	Phương sai
PTN 1	6	573,32	95,55	0,141
PTN 2	6	572,09	95,35	0,217
PTN 3	6	570,42	95,07	0,120

ANOVA

Nguồn sai số	Tổng số bình phương	Bậc tự do	Bình phương trung bình	Ftn	Ftc
Giữa các nhóm	0,706	2	0,353	2,217	3,682
Trong từng nhóm	2,389	15	0,159
Tổng cộng	3,095	17

Biện luận: Ftn = 2,217 < F tc = 3,682

3. Kết luận: Kết quả trung bình của 2 phòng thử nghiệm giống nhau, phương pháp phân tích có độ chính xác cao với giá trị độ tái lặp và độ lặp lại nhỏ.

B. XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ ẤN ĐỊNH CHẤT CHUẨN KAEMPFEROL Bảng 17.4. Kết quả xác định giá trị ấn định

Xếp tăng dần		xi x0 		x*i 1	x*x*2 i11	x*  i 2	x*x*2 i2 2
x*- 1.5s*					94,81		94,80
x*+ 1.5s*					95,69		95,74
1	94,56	0,69			94,81	0,2172	94,81	0,2172
2	94,85	0,40			94,85	0,1773	94,85	0,1773
3	94,97	0,28			94,97	0,0907	94,97	0,0907
4	95,04	0,21			95,04	0,0534	95,04	0,0534
5	95,06	0,19			95,06	0,0446	95,06	0,0446
6	95,07	0,18			95,07	0,0404	95,07	0,0404
7	95,19	0,06			95,19	0,0066	95,19	0,0066
8	95,20	0,05			95,20	0,0051	95,20	0,0051
9	95,21	0,04			95,21	0,0037	95,21	0,0037
10	95,29	0,04			95,29	0,0004	95,29	0,0004
11	95,34	0,09			95,34	0,0047	95,34	0,0047
12	95,36	0,11			95,36	0,0079	95,36	0,0079
13	95,44	0,19			95,44	0,0285	95,44	0,0285
14	95,46	0,21			95,46	0,0357	95,46	0,0357
15	95,51	0,26			95,51	0,0571	95,51	0,0571
16	95,96	0,71			95,69	0,1796	95,69	0,1796
17	96,04	0,79			95,69	0,1796	95,69	0,1796
18	96,28	1,03			95,69	0,1796	95,69	0,1796
x	95,32
N	18
S	0,427
x0	95,25
s0	0,297
x*n 	95,25				95,27		95,27
s*n 	0,297				0,315		0,315

Nhận xét: Giá trị s* không thay đổi sau 2 lần tính, giá trị ấn định được chọn là 95,27% với độ lệch chuẩn là 0,315.

Tính giá trị Z:

Bảng 17.5. Tập hợp kết quả của ba PTN và tính giá trị Z

TT

Xi (%) (nguyên trạng)	Z x* = 95,27 s* = 0,315
1	94,56	-2,26
2	94,85	-1,34
3	94,97	-0,96
4	95,04	-0,73
5	95,06	-0,67
6	95,07	-0,64
7	95,19	-0,26
8	95,20	-0,23
9	95,21	-0,19
10	95,29	0,06
11	95,34	0,22
12	95,36	0,28
13	95,44	0,54
14	95,46	0,60
15	95,51	0,76
16	95,96	2,19
17	96,04	2,44
18	96,28	3,20
TB	95,21% (n = 14, RSD = 0,21%)

Nhận xét: Loại 4 kết quả có giá trị /Z/ > 2, các kết quả còn lại đều có giá trị /Z/ còn

≤ 2.

Chất chuẩn Kaempferol SKS: KC.10.16-04.04 có hàm lượng 95,21% tính theo nguyên trạng, độ không đảm bảo đo mở rộng U = ± 0,45% với hệ số phủ k = 2 ở mức tin cậy 95%.