Nghiên cứu chiết xuất và tinh chế conessin, kaempferol, nuciferin từ dược liệu làm chất chuẩn đối chiếu trong kiểm nghiệm thuốc - Hoàng Thị Tuyết Nhung

PHỤ LỤC 18

A. BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ LIÊN PHÒNG THÍ NGHIỆM CHẤT CHUẨN NUCIFERIN

1. Xác định hàm lượng mẫu thành phẩm (HPLC):

Tiến hành song song với Nuciferin CRS (Trung quốc) SKS: 111566 - 200402 có hàm lượng 100,0% (nguyên trạng).

Pha động: ACN: TEA 0,1% (70 : 30), điều chỉnh tỉ lệ pha động nếu cần.

Dung dịch chuẩn: Hoà tan 25,0 mg Nuciferin chuẩn trong Acetonitril và pha loãng thành 100,0 ml với cùng dung môi. Hút 5,0 ml pha loãng thành 10,0 ml với cùng dung môi.

Dung dịch thử: Hoà tan 25,0 mg mẫu thử trong Acetonitril và pha loãng thành 100,0 ml với cùng dung môi. Hút 5,0 ml pha loãng thành 10,0 ml với cùng dung môi.

Điều kiện sắc ký:

Cột thép không gỉ (15 cm x 4,6 mm) được nhồi octadecylsilyl silica gel dùng cho sắc ký (5µm).

Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 270 nm. Tốc độ dòng: 1,0 ml /phút.

Thể tích tiêm: 10 µl.

Cách tiến hành:

Kiểm tra khả năng thích hợp của hệ thống: Cân bằng cột bằng hỗn hợp pha động ít nhất 30 phút. Tiêm dung dịch chuẩn, hệ số bất đối của pic chính không được lớn hơn 2,0; số đĩa lý thuyết của cột không được nhỏ hơn 2000. Tiêm riêng biệt 6 lần dung dịch chuẩn, độ lệch chuẩn tương đối của diện tích pic chính sau 6 lần tiêm lặp lại không được lớn hơn 1,0%.

Tiêm lần lượt dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Căn cứ vào diện tích pic thu được từ dung dịch thử và dung dịch chuẩn và dựa vào hàm lượng Nuciferin chuẩn (C19H21NO2), tính hàm lượng Nuciferin có trong chế phẩm.

Bảng 18.1. Các thông số của hệ sắc ký

Yêu cầu

PTN 1		PTN 2	PTN 2
Thiết bị	Agilent 1200		Shimadzu LC – 20A	Shimadzu LC – 20A
Cột sắc ký		C18e,	15 cm x 4,6mm; 5µm
Cột sắc ký	Purospher STAR		LichroCART	Gemini
Pha động	Acetonitril – TEA 0,1% (70 : 30)
tr (phút)	6,5		6,4	4,4
N  2000	4274		6100	7413
T  2,0	1,77		1,8	1,13
RSDchuẩn  2,0	0,56		0,37	0,19
%

Có thể bạn quan tâm!

Xem toàn bộ 249 trang tài liệu này.

Bảng 18.2. Kết quả xác định hàm lượng

Yêu cầu

PTN 1		PTN 2	PTN 3
Hàm lượng của mẫu thử không được nhỏ hơn 95% của C19H21NO2 tính theo chế phẩm nguyên trạng	1	99,55	99,25	100,19
	2	99,79	99,44	100,57
	3	100,72	100,82	100,58
	4	99,15	100,98	100,45
	5	99,62	100,68	99,95
	6	100,27	99,65	100,39
	TB	99,85% (nguyên trạng), n = 6 RSD = 0,56%	100,14 % (nguyên trạng) n = 6 RSD = 0,77%	100,26 % (nguyên trạng) n = 6 RSD = 0,27%

2. Xử lý kết quả theo thống kê:

Tập hợp kết quả các PTN và đánh giá theo ANOVA

Bảng 18.3. Kết quả đánh giá theo ANOVA

TÓM TẮT

Nhóm	Số KQ	Tổng	Trung bình	Phương sai
PTN 1	6	600,82	100,14	0,596
PTN 2	6	599,1	99,85	0,314
PTN 3	6	602,07	100,35	0,055

ANOVA

Nguồn sai số	Tổng số bình phương	Bậc tự do	Bình phương trung bình	Ftn	F tc
Giữa các nhóm	0,741	2	0,371	1,152	3,682
Trong từng nhóm	4,827	15	0,322
Tổng cộng	5,568	17

Biện luận: Ftn = 1,152 < F tc = 3,682

3. Kết luận: Kết quả trung bình của 2 phòng thử nghiệm giống nhau, phương pháp phân tích có độ chính xác cao với giá trị độ tái lặp và độ lặp lại nhỏ.

B. XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ ẤN ĐỊNH CHẤT CHUẨN NUCIFERIN

Bảng 18.4. Xác định giá trị ấn định

Xếp tăng dần		xi x0 	x*i 1	xx2 i11	x*i 2	xx2 i2 2
x- 1.5s				99,18		99,14
x+ 1.5s				101,28		101,08
1	99,15	1,08		99,18	0,8612	99,18	0,8612
2	99,25	0,98		99,25	0,7439	99,25	0,7439
3	99,44	0,79		99,44	0,4522	99,44	0,4522
4	99,55	0,68		99,55	0,3164	99,55	0,3164
5	99,62	0,61		99,62	0,2425	99,62	0,2425
6	99,65	0,58		99,65	0,2139	99,65	0,2139
7	99,79	0,44		99,79	0,1040	99,79	0,1040
8	99,95	0,28		99,95	0,0264	99,95	0,0264
9	100,19	0,04		100,19	0,0060	100,19	0,0060
10	100,27	0,04		100,27	0,0248	100,27	0,0248
11	100,39	0,16		100,39	0,0770	100,39	0,0770
12	100,45	0,22		100,45	0,1139	100,45	0,1139
13	100,51	0,28		100,51	0,1580	100,51	0,1580
14	100,58	0,35		100,58	0,2186	100,58	0,2186
15	100,68	0,45		100,68	0,3221	100,68	0,3221
16	100,72	0,49		100,72	0,3691	100,72	0,3691
17	100,82	0,59		100,82	0,5006	100,82	0,5006
18	100,98	0,75		100,98	0,7526	100,98	0,7526
x	100,11
n	18
s	0,57
x0	100,23
s0	0,697
x*n 				100,11		100,11
s*n 				0,645		0,645

Nhận xét: Giá trị s*n không thay đổi sau 2 lần tính, giá trị ấn định được chọn là

100,11% với độ lệch chuẩn là 0,645.

Tính giá trị Z:

Bảng 18.5. Tập hợp kết quả của hai PTN và tính giá trị Z

Xi (%) (nguyên trạng)	Z x* = 100,11 s* = 0,645
1	99,15	-1,49
2	99,25	-1,33
3	99,44	-1,04
4	99,55	-0,87
5	99,62	-0,76
6	99,65	-0,71
7	99,79	-0,50
8	99,95	-0,25
9	100,19	0,12
10	100,27	0,25
11	100,39	0,43
12	100,45	0,53
13	100,51	0,62
14	100,58	0,73
15	100,68	0,88
16	100,72	0,95
17	100,82	1,10
18	100,98	1,35
TB	100,11% n = 18, RSD = 0,57%

Nhận xét: Các kết quả đều có giá trị Z < 2,0, không có kết quả nào bị loại.

Chất chuẩn Nuciferin SKS: KC.10.16 - 04.08 có hàm lượng 100,11 % tính theo nguyên trạng, độ không đảm bảo đo mở rộng U = ± 0,27 % với hệ số phủ k = 2 ở mức tin cậy 95%.

PHỤ LỤC 19

SKĐ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN VÀ ĐỊNH LƯỢNG CONESSIN Ở THỜI ĐIỂM 9 THÁNG

Hình 19.1. SKĐ mẫu trắng xác định tạp chất liên quan và định lượng Conessin ở thời điểm 9 tháng

Hình 19.2. SKĐ mẫu thử xác định tạp chất liên quan và định lượng Conessin ở thời điểm 9 tháng

PHỤ LỤC 20

SKĐ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN VÀ ĐỊNH LƯỢNG KAEMPFEROL Ở THỜI ĐIỂM 9 THÁNG

Hình 20.1. SKĐ mẫu trắng xác định tạp chất liên quan và định lượng Kaempferol ở thời điểm 9 tháng

PHỤ LỤC 21

SKĐ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN VÀ ĐỊNH LƯỢNG NUCIFERIN Ở THỜI ĐIỂM 9 THÁNG

Hình 21.1. SKĐ mẫu trắng xác định tạp chất liên quan và định lượng Nuciferin ở thời điểm 9 tháng