3.2.I.2. Nội dung 2: Trên giống lan Dendrobium.
a) Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của BA và NAA lên quá trình nuôi cấy ìn vừro
của cây lan Dendrobium.
- Thí nghiệm gồm 11 nghiệm thức.
MS | BA (mg/1) | NAA (mg/1) | |
1 | y2 | 0 | 0 |
2 | y2 | 1 | 0 |
3 | y2 | 3 | 0 |
4 | y2 | 5 | 0 |
5 | y2 | 7 | 0 |
6 | y2 | 10 | 0 |
7 | y2 | 1 | 0.5 |
8 | y2 | 3 | 0.5 |
9 | y2 | 5 | 0.5 |
10 | y2 | 7 | 0.5 |
11 | y2 | 10 | 0.5 |
Có thể bạn quan tâm!
-
Ảnh hưởng của các chất điểu hòa sinh trưởng đến quá trình nuôi cấy In Vitro của hai giống lan Dendrobium và Cymbidium - 2 -
Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Đến Nhân Giống In Vừro -
Nội Dung 1: Trên Giống Lan Cymbidium. -
Ảnh Hưởng Của Tdz Và Naa Đến Khả Năng Phát Sinh Phôi Soma, Tạo Protocorm Và Hình Thành Chồi -
Ảnh Hưởng Của Tdz Và Naa Đến Khả Năng Hình Thành Phôi Soma, Protocorm Và Chồi Lan Dendrobium Sau 60 Ngày Nuôi Cấy In Vìtro -
So Sánh Khả Năng Hình Thành Phôi Soma, Protocorm Và Chềỉ Giữa Các Môi Truờng Nuôi Cấy Trên Giống Lan Dendrobium
Xem toàn bộ 88 trang tài liệu này.
- Tổng số bình: 99.
- Số mẫu cấy: 297.
b) Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của TDZ và NAA đến quá trình nuôi cấy in vừro của giống lan Dendrobìum.
- Thí nghiệm gồm 9 nghiệm thức.
Nghiệm thức | MS | TDZ (mg/1) | NAA (mg/1) |
1 | y2 | 0 | 0 |
2 | y2 | 0.05 | 0 |
3 | y2 | 0.1 | 0 |
4 | y2 | 0.5 | 0 |
5 | 1Á | 1 | 0 |
6 | Vi | 0.05 | 0.5 |
7 | Vi | 0.1 | 0.5 |
8 | Vi | 0.5 | 0.5 |
9 | Vi | 1 | 0.5 |
- Tổng số bình: 81.
- Số mẫu cấy: 243.
3.3.2. Các chỉ tiêu theo dõi.
3.3.2.I. Sau 60 ngày nuôi cấy.
Quan sát số lượng phôi soma, protocorm, chồi và chiều cao chồi của tất cả các mẫu cấy ừên 2 giống lan Cymbidium và Dendrobium:
a) Số phôi soma / mẫu cấy = Xphôi soma / Xmẫu cấy.
b) Số protocorm / mẫu cấy = Xprotocorm / Xmẫu cấy.
c) Số chồi / mẫu cấy = Xsố chồi / Xmẫu cấy .
d) Chiều cao chồi = Xchiều cao các chồi / Xsố chồi.
3.3.2.2. Sau 90 ngày nuôi cấy.
Tiến hành đếm số chồi, số lá , số rễ và đo chiều cao của chồi trên tất cả các mẫu cấy.
a) Số chồi / mẫu cấy = Lsổ chồi / Xmẫu cấy.
b) Số lá / chồi = Lsố lá các chồi / Lsổ chồi.
c) Số rễ / chồi = Isố rễ các chồi / Zsổ chồi.
d) Chiều cao chồi = Xchiều cao các chồi / Zsố chồi.
3.2.4. Phân tích thống kê.
Số liệu thu thập được xử lý trên máy vi tính bằng chưomg trình Microsoữ
Excel và chưorng trình thống kê Statgraphics 7.0 (dựa vào giá trị prob trong bảng
ANOVA) để có (hoặc không) phân hạng, nếu có thì sử dụng trắc nghiệm phân hạng LSD để đánh giá kết quả thí nghiệm.
PHÀN 4: KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Giống lan Cymbidium
4.1.1. Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của BA và NAA lên quá trình nuôi cấy in vitro của giống lan Cymbìdìum.
Trong quá trình nuôi cấy in vitro người ta thường sử dụng BA, hoặc kết hợp giữa nồng độ BA cao và nồng độ thấp NAA để tăng hiệu quả nhân giống in vitro (khả năng phát sinh phôi soma, protocorm và chồi).
Bảng 4.1. Ảnh hưởng của BA và NAA đến khả năng phát sinh phôi soma, tạo
protocorm và hình thành chồi của cây Cymbidium in vừro sau 60 ngày nuôi cấy
Nghiệm thức Số phôi soma
/ mẫu cấy
Số protocorm / mẫu cấy Số chồi / mẫu cấy
Chiều cao chồi (cm)
y2 MS
0A
2.22 A
1.56 A
y2 MS+lmg/l BA
0A
3.00 AB
1.78 ABC
1.90 CD
y2 MS+3mg/l BA
0A
3.67 BC
2.33 c
1.85 CD
y2 MS+5mg/l BA
3.44 c
4.33 CD
2.22 BC
1.50 BC
y2 MS+7mg/l BA
3.89 c
5.11 D
1.44 A
0.97 A
y2 MS+10mg/l BA
4.89 D
6.22 E
1.33 A
0.83 A
y2 MS+lmg/1 BA+0.5mg/l NAA
1.67 B
3.56 BC
1.56 A
1.06 AB
y2 MS+3mg/l BA+0.5mg/l NAA
3.56 c
4.44 CD
1.78 ABC
0.99 A
y2 MS+5mg/l BA+0.5 mg/1 NAA
3.78 c
4.67 D
1.67 AB
0.83 A
y2 MS+7mg/l BA+0.5mg/l NAA
4.22 CD
6.11 E
1.78 ABC
0.78 A
y2 MS+10mg/l BA+0.5mg/l NAA
5.11 D
6.78 E
1.89 ABC
0.77 A
Nhận xét:
Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho thấy sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện như sau:
*số lượng phôi soma:
Dựa vào bảng 4.1 cho thấy có sự ảnh hưởng giữa các yếu tố môi trường nuôi cấy lên quá trình phát sinh phôi soma. Những môi trường /4 MS; V4 MS + lmg/1 BA; /4 MS + 3mg/l BA không thấy sự phát sinh phôi soma, do ở những môi trường nuôi cấy này nồng độ BA thấp chưa kích thích sự phân chia tế bào mạnh để phát sinh phôi. Còn ở những môi trường nuôi cấy có nồng độ BA cao (BA= 5mg/l; 7mg/l; 10mg/l) có sự phát sinh phôi soma.
Ngoài ra, khi kết họp giữa BA và NAA vào môi trường nuôi cấy thì khả năng phát sinh phôi soma cao hom khi sử dụng BA. Môi trường lÁ MS + 7mg/l BA số phôi phát sinh là 3.89, còn ở môi trường /4 MS + 7mg/l BA + 0.5mg/l NAA thì khả năng phát sinh phôi là 4.22, môi trường có BA = 10mg/l là 4.89 còn ở môi trường kết họp giữa BA= 10mg/l + NAA= 0.5mg/l là 5.11. Qua đó chứng tỏ NAA có vai trò trong quá trình phát sinh phôi soma.
Như vậy BA và NAA có ảnh hưởng lớn đến quá trình phát sinh phôi soma trong nhân giống in vitro.
*số lưọiig protocorm:
Trong nhân giống
in vitro ngoài việc phát sinh phôi soma còn có sự
tạo
protocorm. Quan sát số lượng protocorm ở bảng 4.1 cho thấy giữa các môi trường nuôi cấy có sự khác biệt nhau.
Sau 60 ngày nuôi cấy, số protocorm hình thành phụ thuộc vào môi trường nuôi cấy, ở môi trường /4 MS số protocorm (2.22) và số protocorm tăng lên ở những môi trường có bổ sung nồng độ BA cao (BA = 5mg/l; 7mg/l; 10mg/l). Ngoài ra khi kết họp giữa BA và NAA thì số protocorm tăng cao hom khi sử dụng BA.
Dựa vào bảng trắc nghiệm phân hạng 4.1 cho thấy ở những môi trường /4 MS
+ 10mg/l BA; y2 MS + 7mg/l BA + 0.5mg/l NAA và y2 MS + 10mg/l BA + 0.5mg/l có số protocorm hình thành cao nhất và khác biệt so với các môi trường khác.
*số lưọiig chồi:
Sau 60 ngày nuôi cấy, bên cạnh sự phát sinh phôi soma và tạo protocorm còn có sự hình thành chồi. Tuy nhiên khả năng hình thành chồi không cao và không thấy
có sự khác biệt lớn giữa các nghiệm thức lên sự hình thành chồi khỉ bổ sung nồng độ BA và NAA càng tăng.
Như vậy ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy in vitro thì BA và NAA không ảnh hưởng lớn đến quá trình hình thảnh
chồi.
*Chiều cao chồi:
Dựa vào bảng trắc nghiệm phân hạng 4.1 cho thấy giữa các môi trường nuôi cấy không cố ảnh hưởng đến sự phát
triển chiều cao chồi.
Ở môi trường đối chứng (Ỷ2 MS) và môi trường cỏ bổ sung BA thấp (BA = lmg/1, BA = 3mg/l) có chiều cao chồi cao nhất và khác biệt với các nghiệm thức còn lại. Chiều cao chồi thấp ở những nồng độ có bổ sung BA cao (BA= 5mg/l; 7mg/l; 10mg/l) là do ở các môi trường này chủ yếu là tạo protocorm và phát sinh phôi soma nên ức chế sự phát triển của chồi.
Hình 4.1: Chài lan Cymbidium sau 60 ngày nuôi cấy in vừro trên môi trường có bể sung BA.
Trong nhân giống in vitro, sau 60 ngày nuôi cấy khả năng phát sinh phôi soma, tạo protocorm được biểu hiện rõ, nhưng sau 90 ngày nuôi cấy các phôi soma và protocorm đều phát triển thành chồi, tuy còn một số protocorm và phôi soma chưa hình thành chồi (ở số lượng ít). Đo đó sau 90 ngày nuôi cấy, quan sát sự sinh trưởng và phát triển của chồi.
Bảng 4.2. Ảnh hưởng của BA và NAA đến sự sinh trưởng và phát triển của chồi lan Cymbidium sau 90 ngày
nuôi cấy in vtíro
Nghiệm thức | Số chồi / | Số lá / | Số rễ / | Chiều cao | |||
'/2MS % MS + lmg/1 BA Vi MS + 3mg/l BA Vi MS + 5mg/l BA % MS + 7mg/l BA % MS + 10mg/l BA Vi MS+lmg/1 BA+0.5mg/l NAA Vi MS+3mg/l BA+0.5mg/l NAA Vi MS+5mg/l BA+0.5mg/l NAA % MS+7mg/l BA+0.5mg/l NAA % MS+10mg/l 2.00 BA+0.5mg/l | c | 2.11 A 3.00 ^ 3.22 ** 4.56 CD 5.33 DEF 6.11 ^ 2.78 ^ 3.83 BC 5.00 CDE 5.78 DEF | 0 | 2.11 ^ 2.50 BC 2.08 A 2.14 ^ 2.04 A 2.11 ^ 2.62 c 2.60 c 2.03 A 2.04 A | 1.99 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.63 | A | 2.97 E 2.33 BCD 1.98 ABC 1.82 ^ 1.83 ^ 1.83 ^ 2.85 DE 2.36 CD 2.17 BC 2.03 ^ |
cv% | 1.62% | 1% | 2.34% | 1.32% | |||
*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05. | |||||||
Nhận xét:
*số lượng chồi:
Dựa vào bảng trắc nghiệm phân hạng 4.2 cho thấy có sự ảnh hưởng của các môi trường nuôi cấy lên sự hình thành chồi lan in vitro.
Ở các nghiệm thức 6 (lÁ MS + 10mg/l BA) và 11 (Vi MS +10mg/l +0.5mg/l NAA) cho thấy số chồi hình thành cao nhất và có sự khác biệt với các nghiệm thức còn lại. Ngoài ra ở những môi trường có bổ sung kết họp BA và NAA luôn cho thấy số chồi hình thành cao hom so với môi trường chỉ có BA. Như vậy BA và NAA có ảnh hưởng lớn đến sự hình thành chồi trong nhân giống in vitro.
*số lượng lá, rễ và chiều cao chồi:
- Số lá: Số lá hình thành không cỏ sự khác biệt giữa các nghiệm thức, số lá không tăng khi nồng độ BA và NAA
tăng.
- Số rễ: Bảng trắc nghiệm phân hạng cho thấy chỉ ở môi trường đối chứng (lA MS) là có sự hình thành rễ. Chứng