Đặc Điểm Khuẩn Lạc, Tinh Thể Và Gen Độc Của Các Chủng Vi Khuẩn Bacillus

LY TRÍCH DNA

Bước 1: Hút 1000 l dịch vi khuẩn từ bình tăng sinh cho vào tube 1.5 ml, sau đó ly tâm 8000 vòng/phút trong 3 phút. Lặp lại thao tác cho đến khi thu được nhiều sinh khối;

Bước 2: Thêm 300 l TE buffer (Tris 10 mM, EDTA 1 mM) rồi vortex đều. Đem đun cách thủy ở 100oC từ 10 đến 20 phút, ủ đá trong 5 phút. Ly tâm 13,000 vòng/phút trong 5 phút;

Bước 3: Hút 200 l dịch nổi cho vào tube mới, sau đó cho vào 20 l CH3COONa, 600 l ethanol 70%. Ủ -20oC từ 1 – 2 giờ, đem ly tâm 13,000 vòng/ phút trong 5 phút;

Bước 4: Loại dịch nổi, để khô tự nhiên, thêm 30 l TE buffer và bảo quản ở nhiệt độ -20oC.

THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ THỰC HIỆN THÍ NGHIỆM

Thiết bị bao gồm máy lắc, tủ ấm, tủ lạnh, bể ổn nhiệt, nồi hấp khử trùng, tủ cấy vi sinh, lò vi sóng, kính hiển vi, cân điện tử, bếp điện từ, máy PCR, máy điện di, máy vortex, máy chụp gel, máy li tâm, máy đo pH, tủ sấy.

Dụng cụ thí nghiệm bao gồm đĩa petri, ống nghiệm, ống đong, pipet thủy tinh, que cấy trải, que cấy ria, bông gòn, đèn cồn, lame, lamel, Micropipiet, ống Efpendoft, đầu tuýp, cốc thủy tinh, bình thủy tinh, ống Falcon, giấy lọc.

THUỐC TRỪ SÂU Vi-Bt® 32000WP

Thuốc trừ sâu Vi-Bt®32000WP được sản xuất và phân phối bởi Công ty cổ phần thuốc sát trùng Việt Nam (VIPESCO). Là thuốc trừ sâu sinh học, có tính chọn lọc cao, diệt toàn bộ sâu ăn lá, thích hợp cho chương trình sản xuất rau sạch và chương trình phòng trừ tổng hợp.

Tên thương mại: Vi-Bt®32000WP

Thành phần: Bacillus thuringiensisvar. kurstaki 32000 UI/mg.

Tác động của thuốc: Tác động vị độc Nhóm độc: Nhóm 3

Mức độ độc: Không độc với cá, ít độc với ong Liều lượng sử dụng: 0,5 – 1 kg/ha pha với 400 lít nước Cách dùng: Phun kỹ, ướt đều cây trồng

Thời gian cách ly: 5 ngày

Khả năng hỗn hợp: Không hỗn hợp với thuốc có tính kiềm

Cơ chế tác động: Sau khi hòa tan trong dịch ruột giữa, tinh thể protein do Bacillus thuringiensis tạo ra sẽ chuyển hóa thành chất độc phá hủy tế bào; côn trùng ngừng ăn, bị đói, bị bệnh và chết sau vài ngày.

Hình 1. Sự phân bố của gen cry1, cry2, cry4, cry9 và vip3a của vi khuẩn Bacillus thuringiensis var. kurstaki ở một số tỉnh, thành Việt Nam.

Bảng 1. Đặc điểm khuẩn lạc, tinh thể và gen độc của các chủng vi khuẩn Bacillus thuringiensis

TT	vi khuẩn	vip3a
1	VBt246.1	Hà Nội Trắng, hình tròn, bề mặt Ovan, cầu cry1, cry4
2	VBt2413.1	Hà Nội Trắng, viền phân thùy, bám Cầu, quả cry1, cry2
3	VBt2119.1	Tròn, màu trắng sữa, bề mặt cry1, cry2,
		và mọc lan ra môi trường
4	VBt21110.1	Tròn, màu trắng sữa, bề mặt cry1, cry2,
		và mọc lan ra môi trường
5	VBt25211.1	Tròn, màu trắng sữa, bề mặt Bình Thuận sần sùi, viền nguyên, hơi mờ Cầu cry1, cry2 và mọc lan ra môi trường
6	VBt281.3	TP.HCM Trắng sữa, hình tròn, nhô lên, Thoi cry1
7	VBt283.2	TP.HCM Trắng, viền phân thùy, bám Thoi cry1
8	VBt2847	TP.HCM Trắng, dạng bất định, viền Thoi cry1, cry2
9	VBt2639.5	Lâm Đồng Trắng sữa, tròn, khô, viền Cầu cry1, cry9
10	VBt26317.2	Lâm Đồng Trắng sữa, viền nhăn, bề mặt Quả trám cry1, cry2
11	VBt26310.1	Lâm Đồng Trắng kem, tròn, khô, bề mặt Thoi cry4
12	VBt2736.2	Tiền Giang Tròn, trắng sữa, viền nhăn, Thoi cry1, cry2,
13	VBt27310	Tiền Giang Dạng bất định, trắng, viền Thoi cry2
14	VBt2735.1	Tiền Giang Trắng sữa, dạng bất định, Thoi cry1, cry2,
15	VBt2751	Tròn, màu trắng sữa, bề mặt Bến Tre phẳng, khô, có viền nhăn răng Thoi cry1, cry2

Có thể bạn quan tâm!

Xem toàn bộ 262 trang tài liệu này.

Số Chủng

Tỉnh Đặc điểm khuẩn lạc Tinh thể Gen cry,

nhăn, viền gợn sóng

Vĩnh Phúc

chặt vào môi trường

sần sùi, viền nguyên, hơi mờ

trám

Thoi, ovan

vip3a

Vĩnh Phúc

sần sùi, viền nguyên, hơi mờ

Thoi, ovan

vip3a

nhầy, viền nhẵn chặt vào môi trường nhăn,trong lõm răng cưa,

khô, nhô lên nhô lên

bề mặt ướt, nhô lên

vip3a

phân thùy, bề mặt khô

viền nhăn, bề mặt phẳng

vip3a

cưa, chấm nhỏ ở tâm

16	VBt2752.2	Bến Tre
17	VBt27510	Bến Tre
18	VBt2762.1	Tây Ninh
19	VBt2767.6	Tây Ninh
20	VBt27611	Tây Ninh

Tròn, trắng sữa, bề mặt khô nhầy,có chấm nhỏ trắng ở

tâm

Trắng, bất định, viền phân thùy, bề mặt phẳng, khô

Thoi, cầu cry1, cry2,

cry4

Thoi, ovan cry1, vip3a

Trắng, nhô, nhám Thoi cry1, cry2

Trắng, thô, bề mặt hình răng cưa

Trắng, hình tròn, viền mờ lan

ra xung quanh

Thoi cry1, cry2

Hình 2. Thu thập mẫu đất ở các khu vực đất nông nghiệp, phi nông nghiệp, đất rừng, ven sông tại các tỉnh, thành Việt Nam.

Hình 3. Thu thập mẫu đất ở các khu vực đất canh tác, đất không canh tác tại một số tỉnh, thành Việt Nam.

Hình 4. Nhân nuôi sâu tơ, sâu khoang, sâu xanh da láng và trồng cải phục vụ thí nghiệm sinh học tại nhà lưới Viện Nghiên cứu Công nghệ sinh học và Môi trường, Trung tâm Giống cây trồng, vật nuôi và thủy sản TP.HCM