Phân Lập, Định Danh Vi Khuẩn Bacillus Và Khảo Sát Khả Năng Chuyển Hóa Ammonia Của Các Dòng Vi Khuẩn Bacillus

1.2 Phân lập, định danh vi khuẩnBacillus và khảo sát khả năng chuyển hóa ammonia của các dòng vi khuẩn Bacillus

Hình 1.3 Một số hình ảnh thu mẫu ở Vịnh Xuân Đài

1.2.1 Môi trường trypticase soya agar (TSA) ( phân lập Bacillus )

Soya peptone 15g

Tryptone peptone 5g

Agar 18g

NaCl 5g

Nước cất 1000ml

pH 7,3

1.2.2 Hình ảnh các dòng vi khuẩn Bacillus và phản ứng sinh hóa.

Hình 1.4 Các dòng vi khuẩn và các phản ứng sinh hóa

Hình 1.5 Định tính khả năng chuyển hóa ammonia của Bacillus sp.

Khóa phân loại Bergey của nhóm vi khuẩn Bacillus sp.

1.2.3 Kết quả định danh sinh học phân tử

Kết quả giải trình tự dòng B2 AGTGCCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTAGAACGGCACTTGTTCT TCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCC

GTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGC

CGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTCGCCTT GGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAG CCGAAGCCACCTTTTATGTCTGAACCATGCGGTTCAAACAACCATCCGGTATTAGCCC CGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTC CGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTTGCATGTATTAGGC ACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCCAAAAATAAACCCA

Kết quả giải trình tự dòng B5 TGGTGGGGGGGGAAGAACAAATACTTGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTC CCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGG ATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAAC ATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGG TGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCC ACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTC CGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGAT CGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGAC GGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAAAACACC

Kết quả giải trình tự dòng B31 ATCGGGTGGCCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTG TTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGC TCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTG GGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTCG CCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTG GTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTCTGAACCATGCGGTTCAAACAACCATCCGGTATTA GCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACC CGTCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTTGCATGTATT AGGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCTCAAA

Kết quả giải trình tự dòng B58 AGGGGGGGAACGTTGCCTAATAAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCC CTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGA TAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACA TAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGT GAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCA CACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCC GCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATC GTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACG GTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCCGGTAATAAAA

Kết quả giải trình tự dòng B68 AGTTGGGGGGCGTGCCTATACTGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGA TGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAAC TCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATAAA AGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGG TAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACT GGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAA TGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAA AGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTAC CTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCCGGTAATAAAA

Kết quả giải trình tự dòng B74 CCGTGGCTTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTTC TTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCC GTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGC CGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTTGCCTT GGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAG CCAAAGCCACCTTTTATGTTTGAACCATGCGGTTCAAACAACCATCCGGTATTAGCCCC GGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTC GCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTTGCATGTATTAGGCA CGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGAATCAAAACTCTCCAA

Kết quả giải trình tự dòng B85 ACCCTTGCTTTTCTGGTAAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTT CTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTC CGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGG CCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTTGCCT TGGTGAGCCATTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTA GCCGAAGCCACCTTTTATGTTTGAACCATGCGGTTCAAACAACCATCCGGTATTAGCCC CGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTC CGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTTGCATGTATTAGGC ACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCCAAACTCAATCAA

Kết quả giải trình tự dòng B91 AGGGGCCGGGGTGCCTATAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGAT GTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACT CCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAA GGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGT AACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTG

GGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAAT GGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAA GCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACC TAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCCGGTAATAAACA.

1.2.4 Hiệu suất chuyển hóa ammonia của 13 dòng vi khuẩn Bacillus sp.

Bảng 1.1 Số liệu hiệu suất chuyển hóa ammonia của 7 dòng vi khuẩn Bacillus sp.

Hàm lượng NH4+ (mg/L) chuyển hóa

						hóa (%)
B2	0,576b±0,03	0,408bc±0,05	0,199de±0,02	0,104cd±0,02	0,041c±0,01	88,6
B7	0,358d±0,03	0,227d±0,04	0,155e±0,02	0,068d±0,01	0,035c±0,01	92,6
B9	0,469c±0,03	0,354bcd±0,05	0,215bcde±0,03	0,148bc±0,02	0,064bc±0,03	83,8
B11	0,564b±0,03	0,460b±0,01	0,246bcd±0,06	0,162bc±0,06	0,074bc±0,03	82,3
B12	0,525bc±0,04	0,356bcd±0,03	0,237bcde±0,03	0,167bc±0,04	0,089bc±0,05	81,8
B18	0,469c±0,03	0,354bcd±0,06	0,198de±0,06	0,129bcd±0,03	0,085bc±0,04	85,9
B91	0,530bc±0,02	0,366bcd±0,05	0,205cde±0,03	0,172bc±0,02	0,143b±0,01	81,2

Có thể bạn quan tâm!

• Guan. X & Yao. H., 2008. Optimization Of Viscozyme L-Assisted Extraction Of Oat Bran Protein Using Response Surface Methodology. Food Chemistry 106 (1): 345-351.
• Nghiên cứu vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong nền đáy vùng nuôi tôm hùm panulirus sp. phục vụ nuôi trồng thủy sản - 21
• Khảo Sát Hàm Lượng Mật Rỉ Của P. Stutzeri Kl15 33
• Hình Ảnh Tra Phần Mềm Phản Ứng Sinh Hóa Của Nhóm Vi Khuẩn Aob/nob
• Kết Quả Sinh Hóa Để Xác Định 2 Chủng Vi Khuẩn C9/1, T5/3 Thuộc Chi Bacillus Sp. ( Khóa Phân Loại Bergey).
• Đường Tuyến Tính Mật Số Vi Sinh Vật Với Od600Nm

Xem toàn bộ 247 trang tài liệu này.

Chủng vi khuẩn

6 12 24 36 48 Hiệu suất chuyển

Trong cùng một cột, các giá trị có ký tự theo sau giống nhau không có sự khác biệt về mặt thống kê (P < 0,01).

Bảng 1.2 Số liệu hiệu suất chuyển hóa ammonia của 6 dòng vi khuẩn Bacillus sp (Hình 3.2)

Thời gian ( giờ)

	Hàm lượng NH4+ (mg/L) chuyển hóa
B5	B31	B58	B68	B74	B85
6	0,233c ± 0,1	0,862b ± 0,1	1,973a ± 0,1	0,751b ±0,01	1,973a±0,1	1,010b ± 0,064
12	3,146a ± 0,1	1,073c ± 0,1	2,221b ± 0,064	3,220a± 0,11	2,221b ±0,064	2,332b ± 0,064
24	8,987b ± 0,08	10,515a± 0,1	8,198c ±0,034	8,404c±0,12	8,254c ± 0,1	9,046b ± 0,063
36	0,468a ± 0,01	0,211c ± 0,034	0,305bc ±0,006	0,509a0,14	0,248c ±0,009	0,417ab ± 0,062
48	0,040c ±0,003	0,121bc ±0,013	0,267a ± 0,002	0,074c ±0,04	0,187b±0,029	0,155b ± 0,02
Hiệu suất chuyển hóa (%)	99,7	99,1	97,9	99,4	98,6	98,8

Trong cùng một cột, các giá trị có ký tự theo sau giống nhau không có sự khác biệt về mặt thống kê (P < 0,05).

1.3 Phân lập, định danh vi khuẩn AOB và khảo sát khả năng chuyển hóa ammonia của nhóm vi khuẩn

1.3.1 Thành phần môi trường

Môi trường phân lập vi khuẩn: môi trường ammonium-calcium-carbonate được sử dụng để phân lập vi khuẩn dựa theo phương pháp của Ehrlich (1975)

(NH4)2SO4 0,5g

K2HPO4 1g

FeSO4.7H2O 0,03g

NaCl 0,3g

MgSO4.7H2O 0,3g

CaCO3 7,5g

Môi trường nuôi tăng sinh vi khuẩn được chuẩn bị theo công thức môi trường của Lewis và Pramer (1958) và MacDonad và Spokes (1980).

Na2HPO4 13,5g

KH2PO4 0,7g

MgSO4.7H2O 0,1g

NaHCO3 0,5g

(NH4)2SO4 2,5g

FeCl3.6H2O 0,0142g

CaCl2.2H2O 0,0184g

Thuốc thử Griess – Ilosway dùng để kiểm tra sự hiện diện của NO2- bao gồm dung dịch A (thuốc thử acid sulfanilic), dung dịch B (thuốc thử N –(1-naphthyl) ethylenediamine) và dung dịch C (thuốc thử alpha- Naphthol) được chuẩn bị sẳn.

Một ít Tris HCl được thêm vào để tránh sự kết tủa của các nguyên tố vi lượng trong môi trường (thể tích 1000 ml nước cất). (NH4)2SO4 được tiệt trùng chuyên biệt sau đó thêm vào dung dịch môi trường trong điều kiện vô trùng.

1.3.2 Tuyển chọn và phân lập nhóm vi khuẩn chuyển hóa ammonia

Ghi chú: trắng (-), đỏ (+)

Hình 1.6 Sự hiện diện của nhóm AOB trong mẫu bùn

Bảng 1.3 Mật độ vi khuẩn của nhóm AOB trong mẫu bùn

STT

Ký hiệu mẫu	MPN /gam	STT	Ký hiệu mẫu	MPN /gam
1	BT1	1,5 x 104	12	BC12	1,6 x 103
2	BT2	1,5 x 104	13	BC13	2,4 x 103
3	BT3	4,3 x 103	14	BC14	1,5 x 104
4	BT4	1,2 x 104	15	BC15	1,6 x 103
5	BT5	7,5 x 103	16	BC16	2,4 x 103
6	BT6	7,5 x 103	17	BC17	2,1 x 103
7	BT7	4,3 x 103	18	BC18	2,8 x 103
8	BT8	2,1 x 104	19	BC19	2,4 x 103
9	BT9	1,5 x 104	20	BC20	2,1 x 103
10	BT10	9,3 x 103	21	BC21	2,4 x 103
11	BC11	0,9 x 103	22	NTĐC	< 3

Bảng 1.4 Định tính khả năng chuyển hóa ammonia của các dòng vi khuẩn AOB

Dòng

Chuyển hóa NH3	Dòng	Chuyển hóa NH3
KL1	++	KL19	+
KL2	+ + + +	KL20	++
KL3	+	KL21	+ + + +
KL4	+ + +	KL22	+
KL5	+ +	KL23	+ ++

KL6

+	KL24	+
KL7	+	KL25	+ +
KL8	+ +	KL26	+ + + +
KL9	+ +	KL27	+ +
KL10	+ + + +	KL28	+
KL11	+ + + +	KL29	+
KL12	+	KL30	+ + + +
KL13	+	KL31	+
KL14	+ + + +	KL32	+
KL15	+ + + +	KL33	+ + + +
KL16	+++	KL34	+++
KL17	++	KL35	+ + + +
KL18	+++	ĐC	-

Ghi chú: (+) rất yếu, (+ +) yếu, (+ + +) vừa, (+ + + +) mạnh

Hình 1.7 Một số khuẩn lạc phân lập tại Vịnh Xuân Đài

Hình 1.8 Định tính khả năng chuyển hóa ammonia của nhóm AOB

( Ghi chú: xanh (-), vàng (+))

Chủng vi khuẩn (1)	Đại thể (2)	Vi thể (3)	Mô tả (4)
KL2			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, nhầy, màu trắng sữa, rìa răng cưa. Vi thể: Tế bào gram âm, hình que ngắn, gần tròn, tồn tại ở đạng đơn, đôi hoặc tụ thành đám.
KL10			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, lồi, nhầy, màu trắng đục nhạt. Vi thể: Tế bào hình que, gram âm.
KL11			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, lồi, nhầy, màu trắng hơi vàng. Vi thể: tế bào gram âm, hình que.
KL14			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, lồi, nhầy, màu vàng nhạt. Vi thể: tế bào hình que, gram âm.
KL15			Đại thể: Khuẩn lạc khô, nhăn, không có hình dạng cố định, màu vàng. Vi thể: Tế bào gram âm, hình que dài, nhỏ.
KL21			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, lồi nhầy, có màu vàng nhạt. Vi thể: Tế bào gam dương, hình que ngắn, tù ở 2 đầu, tồn tại ở dạng đơn.
KL26			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, lồi, nhầy, bóng nhớt, màu hồng dâu. Vi thể: Tế bào hình cầu, gram âm
KL30			Đại thể: Khuẩn lạc tròn, lồi, nhầy, màu trắng đục, khuẩn lạc nhăn ở rìa sau 48h cấy. Vi thể: Tế bào hình que, gram dương.

1.3.3 Hình ảnh đại thể vi khuẩn, gram của các chủng vi khuẩn Bảng 1.5 Hình ảnh các chủng vi khuẩn của 10 chủng AOB‌