TRƯỜNG ĐẠI HỌC KINH TẾ - KỸ THUẬT CÔNG NGHIỆP
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM
----------
BÙI THỊ HƯƠNG GIANG
PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CHỦNG PROBIOTIC SINH TỔNG HỢP BACTERIOCIN TỪ RUỘT TÔM NƯỚC MẶN TỈNH NAM ĐỊNH ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT
THỨC ĂN CHĂN NUÔI TÔM
LUẬN VĂN THẠC SĨ
Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số: 8540101
: PGS.TS. Vũ Văn Hạnh | |
Người hướng dẫn khoa học 2 | : PGS.TS. Hồ Tuấn Anh |
Có thể bạn quan tâm!
-
Phân lập và tuyển chọn chủng probiotic sinh tổng hợp bacteriocin từ ruột tôm nước mặn tỉnh Nam Định để ứng dụng trong sản xuất thức ăn chăn nuôi tôm - 2 -
Tổng Quan Các Công Trình Nghiên Cứu, Sản Xuất Bacteriocin Trong Và Ngoài Nước -
Đối Tượng, Nội Dung Và Phương Pháp Nghiên Cứu
Xem toàn bộ 81 trang tài liệu này.
LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn đều trung thực, chưa được công bố trong các tài liệu khác. Đây là công trình từ thành quả lao động và nghiên cứu khoa học của cá nhân tôi với sự hỗ trợ của giáo viên hướng dẫn là PGS.TS. Vũ Văn Hạnh và PGS.TS. Hồ Tuấn Anh.
Những thông tin trong luận văn có liên quan đến các công trình, tác giả, cơ quan, tổ chức khác được thể hiện trong phần Tài liệu tham khảo.
Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm theo quy định về nghiên cứu khoa học và nội dung luận văn của mình.
Hà Nội, ngày tháng năm 2021
HỌC VIÊN
Bùi Thị Hương Giang
LỜI CẢM ƠN
Để hoàn thành luận văn này tôi đã nhận được sự giúp đỡ tận tình của các thầy cô, các anh chị, bạn bè, các đồng nghiệp và những người thân yêu trong gia đình tôi.
Trước hết, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS.TS. Vũ Văn Hạnh, PGS.TS. Hồ Tuấn Anh đã trực tiếp hướng dẫn, động viên, quan tâm và tạo mọi điều kiện giúp đỡ, chỉ bảo tôi trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành công trình nghiên cứu này.
Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên khoa Công nghệ thực phẩm, trường Đại học Kinh tế - Kỹ thuật Công nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu.
Tôi xin cảm ơn các anh chị Phòng Các chất chức năng sinh học - Viện Công nghệ sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn.
Xin trân trọng cảm ơn !
Hà Nội, ngày tháng năm 2021
HỌC VIÊN
Bùi Thị Hương Giang
MỤC LỤC
LỜI CAM ĐOAN i
LỜI CẢM ƠN ii
DANH MỤC VIẾT TẮT v
DANH MỤC HÌNH vi
DANH MỤC BẢNG vii
MỞ ĐẦU 1
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4
1.1. Probiotics trong chăn nuôi tôm 4
1.2. Bacteriocin trong chăn nuôi tôm 5
1.3. Nuôi tôm công nghệ cao 7
1.4. Tổng quan các công trình nghiên cứu, sản xuất bacteriocin trong và ngoài nước 11
1.5. Cơ sở thực tiễn 17
CHƯƠNG 2: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 19
CHƯƠNG 3. ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG 20
VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20
3.1. Đối tượng nghiên cứu 20
3.1.1. Vật liệu 20
3.1.2. Dụng cụ máy móc, thiết bị, hoá chất 20
3.1.3. Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 20
3.2. Nội dung nghiên cứu 21
3.3. Phương pháp nghiên cứu và kỹ thuật sử dụng 21
3.3.1. Phương pháp phân lập, làm thuần chủng và tuyển chọn vi sinh vật 21
3.3.2. Định danh chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp bacteriocin đã được tuyển chọn 25
3.3.3. Nghiên cứu xác định thành phần môi trường dinh dưỡng và điều kiện lên men phù hợp cho quá trình sinh tổng hợp bacteriocin 27
3.3.4. Nghiên cứu xây dựng phương pháp thu nhận sản phẩm bacteriocin qui mô phòng thí nghiệm 28
3.4. Phương pháp xử lý số liệu 29
CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30
4.1. Phân lập và tuyển chọn các chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp bacteriocin từ ruột tôm nước mặn tại vùng biển Nam Định 30
4.2. Định danh đến loài chủng vi sinh vật được tuyển chọn 39
4.3. Nghiên cứu xác định thành phần môi trường dinh dưỡng và điều kiện lên men phù hợp cho quá trình sinh tổng hợp bacteriocin 42
4.3.1. Ảnh hưởng của hoạt tính kháng khuẩn qua các thế hệ nuôi cấy 42
4.3.2. Nghiên cứu đặc điểm nuôi cấy của chủng Bacillus subtilis N1.4 42
4.3.2.2.Nghiên cứu điều kiện lên men cho quá trình sinh tổng hợp bacteriocin của chủng Bacillus subtilis N1.4 44
4.4. Nghiên cứu xây dựng phương pháp thu nhận sản phẩm bacteriocin quy mô phòng thí nghiệm 46
4.4.1. Nghiên cứu quy trình thu nhận bacteriocin 46
4.4.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến độ bền của bacteriocin 49
4.4.3. Ảnh hưởng của pH đến độ bền của dịch bacteriocin và hoạt tính enzyme 51
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 53
TÀI LIỆU THAM KHẢO 54
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
Từ Tiếng Anh | Nghĩa Tiếng Việt | |
GRAS | Generally regarded as safe | Vi sinh vật an toàn |
LAB | Lactic Acid Bacteria | Vi khuẩn lactic |
CMC | Carboxymethylcellulose | |
NTTS | Nuôi trồng thuỷ sản | |
LB | Môi trường nuôi cấy LB | |
FAO | Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp Liên Hợp Quốc |
DANH MỤC HÌNH
Tên hình | Trang | |
1 | Hình 3.1. Qui trình phân lập và làm thuần các chủng thu được từ ruột tôm 10-4 | 22 |
2 | Hình 3.2. Sơ đồ kiểm tra hoạt tính enzyme ngoại bào của các chủng vi sinh vật phân lập | 22 |
3 | Hình 3.3. Sơ đồ kiểm tra hoạt tính ức chế vi khuẩn gây bệnh của các chủng vi sinh vật phân lập | 24 |
4 | Hình 4.1. Khả năng sinh tổng hợp enzyme amylase, cellulase và protease | 34 |
5 | Hình 4.2. Khả năng kháng các chủng vi khuẩn kiểm định của các chủng vi khuẩn phân lập từ ruột tôm. | 38 |
6 | Hình 4.3. Trình tự đoạn gen của rARN 16S của chủng vi khuẩn chọn lọc N1.4 | 40 |
7 | Hình 4.4. Cây phát sinh chủng loại của chủng vi khuẩn chọn lọc N1.4 với các trình tự gen trên GenBank có mức độ tương đồng cao nhất | 41 |
8 | Hình 4.5. Khả năng kháng các chủng vi khuẩn kiểm định của các chủng phân lập được qua các thế hệ từ 2 đến 5 | 42 |
9 | Hình 4.6. Qui trình chiết tách bacteriocin từ chủng N1.4 | 48 |
10 | Hình 4.7. Khả năng kháng các chủng vi khuẩn kiểm định của chủng N1.4 trên môi trường LB và khả năng sinh tổng hợp enzyme trên các môi trường chứa cơ chất đặc hiệu | 50 |
11 | Hình 4.8. Khả năng kháng các chủng vi khuẩn kiểm định của chủng N1.4 trên môi trường ở 37°C | 52 |
DANH MỤC BẢNG
Tên bảng | Trang | |
1 | Bảng 3.1. Trình tự mồi sử dụng trong nghiên cứu | 26 |
2 | Bảng 3.2. Thành phần phản ứng PCR | 27 |
3 | Bảng 3.3. Chu trình phản ứng PCR | 27 |
4 | Bảng 4.1. Mật độ vi sinh vật từ các mẫu tôm nước mặn | 30 |
5 | Bảng 4.2. Khả năng sinh tổng hợp enzyme ngoại bào của các chủng phân lập từ ruột tôm | 31 |
6 | Bảng 4.3. Khả năng kháng khuẩn của các chủng phân lập được từ ruột tôm | 35 |
7 | Bảng 4.4. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến chủng Bacillus subtilis N1.4 | 43 |
8 | Bảng 4.5. Ảnh hưởng của điều kiện lên men cho quá trình sinh tổng hợp bacteriocin | 44 |
9 | Bảng 4.6. Ảnh hưởng của thời gian lên men đến khả năng kháng khuẩn | 45 |
10 | Bảng 4.7. Ảnh hưởng của thời gian lên men đến hoạt tính enzyme thủy phân | 46 |
11 | Bảng 4.8. Khả năng chiết tách của các dung môi khác nhau đối với bateriocins từ dịch nổi | 47 |
12 | Bảng 4.9. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính kháng khuẩn | 49 |
13 | Bảng 4.10. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính kháng khuẩn | 51 |
14 | Bảng 4.11. Ảnh hưởng của protease đến hoạt tính kháng khuẩn của bacteriocin | 52 |